Zakrzepica zastawki AV u NHP: interpretacja punktów końcowych przepływu, skrzepliny i krwawienia
Ilość skrzepu odzyskanego na koniec badania zakrzepicy zastawki tętniczo-żylnej (AV) jest jednym z wielu odczytów. wModel bocznika AV naczelnych innych niż człowiek (NHP).krew przepływa przez określony pozaustrojowy segment testu pod ciśnieniem. Konfiguracja umożliwia ocenę zachowania przepływu i tworzenia się skrzepliny na powierzchni stykającej się z krwią, a uzupełniające punkty końcowe hemostazy opisują bezpieczną stronę odpowiedzi przeciwzakrzepowej.
Pomiary te odpowiadają na różne pytania. Przepływ wskazuje, czy rozwijający się skrzeplina wpływa na drożność. Obciążenie skrzepliną opisuje materiał osadzony na segmencie testowym lub w jego obrębie.Krwawienie i hemostazapomiary pokazują, czy hamowanie zakrzepicy wiąże się z nadmiernym wpływem na prawidłową hemostazę. Żaden pojedynczy punkt końcowy nie obejmuje wszystkich trzech wymiarów farmakologii.
Co mierzy model bocznika AV
Modele zakrzepicy zastawki AVumieścić urządzenie testowe lub segment przeszczepu w obwodzie, który wystawia je na działanie płynącej krwi. Kontakt z obcą powierzchnią, lokalna geometria i powstałe pole przepływu inicjują adhezję i aktywację płytek krwi, koagulację i tworzenie fibryny. Równowaga między tymi procesami zależy od badanego artykułu, materiału powierzchni, geometrii urządzenia i warunków hemodynamicznych, a także wyjściowego stanu hematologicznego zwierzęcia.
Prace historyczne wykazały wykonalność pomiaru tworzenia się skrzeplin u małp rezusów przy użyciu urządzeń testowych wystawionych na działanie krwi w zastawkach tętniczo-tętniczych lub tętniczo-żylnych. W jednym badaniu skrzeplinę odłożoną podczas określonej ekspozycji oznaczono grawimetrycznie; geometria i materiał urządzenia miały wpływ na odzyskaną ilość, a badacze zgłosili bardziej przewidywalny przepływ w AV niż w konfiguracji tętniczo-tętniczej.[1] W powiązanym badaniu wykorzystano ten model do porównaniaśrodki przeciwzakrzepoweoraz połączony grawimetryczny pomiar skrzepliny z oceną ultrastrukturalną.[2] Badania te dostarczają dowodu słuszności, a nie gotowego protokołu lub uniwersalnego zakresu referencyjnego dla współczesnego badania NHP.
Traktuj model jako kontrolowane, ostre wyzwanie trombogenne zbudowane wokół przepływu krwi i określonej powierzchni stykającej się z krwią. Nie odtwarza wszystkich cech spontanicznej zakrzepicy tętniczej lub żylnej u pacjentów. Punktu końcowego dotyczącego skrzepliny związanego z urządzeniem nie należy interpretować jako bezpośredniego wskaźnika pęknięcia blaszki miażdżycowej, żylnej choroby zakrzepowo-zatorowej, udaru, zawału mięśnia sercowego lub klinicznej niewydolności przeszczepu.
Trzy domeny punktów końcowych i dlaczego powinny pozostać odrębne
1. Przepływ i drożność bocznika
Przepływ jest funkcjonalnym odczytem rozwijającej się interakcji pomiędzy skrzepliną a obwodem testowym. W zależności od projektu badania przydatne podsumowania obejmują podstawowy i szeregowy profil przepływu, zmianę od wartości bazowej, przepływ w czasie lub czas do wcześniej określonego zmniejszenia lub przerwania przepływu. Jeśli przepływ jest stale monitorowany, dane pokazują, kiedy zaczyna się zmiana i czy się utrzymuje, a jest to informacja, której sam pomiar końcowy nie jest w stanie dostarczyć.
Przepływ należy interpretować w odniesieniu do systemu pomiarowego. Umiejscowienie sondy, rezystancja obwodu, wymiary urządzenia, warunki ciśnieniowe, temperatura i przerwy techniczne mają wpływ na rejestrowany sygnał. Protokół powinien definiować akceptowalny zakres wartości wyjściowych, sposób postępowania z artefaktami sygnału i co stanowi interpretowalne zmniejszenie przepływu przed porównaniem grup terapeutycznych. „Czas do okluzji” ma znaczenie tylko wtedy, gdy próg i okno obserwacji są z góry określone, a model niezawodnie osiąga to zdarzenie w wybranych warunkach.
Mniejsza masa skrzepliny nie świadczy o zachowaniu przepływu, a zachowany przepływ nie świadczy o powstaniu małej skrzepliny. Nieokluzyjny osad gromadzi się bez nagłej zmiany przepływu; strategicznie zlokalizowane złoże utrudnia przepływ pomimo niewielkiej masy całkowitej. Przepływ i obciążenie skrzepliną uzupełniają się i żadne z nich nie zastępuje drugiego.
2. Obciążenie i skład skrzepliny
Ocena skrzepliny końcowej określa ilościowo materiał utworzony na segmencie testowym lub w jego obrębie. Pomiar grawimetryczny jest bezpośrednią, ustaloną metodą w historycznej literaturze dotyczącej naczelnych, ale wynik zależy od standaryzowanego odzyskiwania, obchodzenia się i ważenia. Protokół powinien określać, czy mierzonym punktem końcowym jest masa mokra czy przetworzona, w jaki sposób uwzględnia się resztki krwi i czy wyniki normalizuje się w stosunku do odpowiedniej cechy wyrobu, takiej jak narażony obszar lub czas trwania narażenia. Wybory te muszą być spójne we wszystkich grupach i zgłaszane w ten sam sposób.
Sama masa nie ujawnia, co zawiera skrzep i jak powstał. Tam, gdzie jest to uzasadnione naukowo, obrazowanie lub mikroskopia oraz ukierunkowana ocena składników płytek krwi i fibryny dodają kontekst mechanistyczny. Takie analizy pomagają odróżnić zmianę całkowitego odkładania się od zmiany względnego udziału materiału bogatego w płytki krwi i materiału bogatego w fibrynę. Zdefiniuj z wyprzedzeniem metodę, miejsce pobierania próbek i podejście do punktacji, a eksploracyjny odczyt morfologii traktuj jako eksploracyjny, dopóki nie zostanie on zakwalifikowany.
Przydatny zestaw punktów końcowych łączy obserwację w obwodzie z odzyskaną próbką: trajektoria przepływu podczas ekspozycji, ilość skrzepliny w punkcie końcowym oraz, jeśli uwzględniono, charakterystyka składu skrzepu. Ta sekwencja daje pełniejszy odczyt niż pojedyncza masa końcowa.
3. Krwawienie i hemostaza
Działanie przeciwzakrzepowe i jegowpływ na hemostazęnależą do tej samej analizy. Badanie zazwyczaj łączy obserwacje kliniczne krwawienia, ocenę dostępu lub miejsc zabiegowych, zdefiniowany w protokole pomiar krwawienia oraz dane laboratoryjne lub farmakodynamiczne istotne dla mechanizmu działania leku. Precyzyjny panel opiera się na artykule testowym i pytaniu badawczym, a nie na szablonie skopiowanym z innego gatunku lub klasy farmakologii.
Czas krwawienia, jeśli jest stosowany, jest miarą zależną od kontekstu, na którą wpływa metoda i wykonanie; nie jest to bezpośrednia ocena klinicznego ryzyka krwawienia. Podobnie rutynowe testy krzepnięcia, liczenia płytek krwi lub testów funkcji płytek krwi wychwytują tylko część hemostazy i nie są jednakowo czułe na każdy mechanizm. Interpretacja jest lepsza, gdy obserwacje zestawi się z danymi dotyczącymi narażenia i danymi farmakodynamicznymi, takimi jak odpowiedni test krzepnięcia lub szlaku płytek krwi, zamiast traktować jakikolwiek pojedynczy wynik laboratoryjny jako pełny wniosek dotyczący bezpieczeństwa.
Punkty końcowe związane z krwawieniem również wymagają ustandaryzowanego podejścia idobrostan zwierzątrecenzja w NHP. Protokół powinien określać sposób obserwacji i klasyfikacji zdarzeń, odpowiedni okres obserwacji, kryteria obserwacji lub interwencji oraz sposób odróżniania krwawienia proceduralnego od sygnału związanego z lekiem. Stwierdzenie w niewielkim badaniu zmniejszonej zakrzepicy bez wykrytego krwawienia nie potwierdza twierdzenia o „braku ryzyka krwawienia”.
Zbuduj pakiet punktów końcowych wokół kwestii farmakologii
Wybór punktu końcowego następuje zgodnie z zamierzoną decyzją. Program przeciwpłytkowy zwykle wymaga odkładania lub czynności płytek krwi, przepływu i oceny hemostazy. Program antykoagulacyjny uwzględnia farmakodynamikę i ekspozycję szlaku krzepnięcia, które umożliwiają interpretację zmiany w tworzeniu skrzepliny. Urządzenie do modyfikacji powierzchni kładzie nacisk na osadzanie specyficzne dla materiału i charakterystykę powierzchni. W każdym przypadku punkty końcowe wywodzą się z mechanizmu działania i ograniczeń modelu.
Spójne badanie przecieku AV zazwyczaj łączy cztery strumienie informacji:
- Odpowiedź funkcjonalna:zachowanie przepływu i wszelkie wcześniej określone pomiary drożności lub okluzji.
- Odpowiedź skrzepliny:zdeponowanej ilości, z oceną składu lub morfologii, jeśli jest to uzasadnione.
- Farmakologia:narażenie na artykuł testowy i pomiary farmakodynamiczne istotne dla mechanizmu w możliwych do zinterpretowania punktach czasowych.
- Kontekst hemostatyczny:kliniczne obserwacje krwawień i wybrane pomiary laboratoryjne lub funkcjonalne odpowiednie dla kandydata.
Plan analizy powinien identyfikować pierwszorzędowy punkt końcowy i odróżniać go od środków pomocniczych lub eksploracyjnych. Randomizacja, ślepa ocena, jeśli to możliwe, warunki kontroli,uzasadnienie wielkości próbyi predefiniowane postępowanie w przypadku awarii technicznych zmniejszają niepewność interpretacyjną. Jeżeli rozważane jest narażenie powtarzane lub porównania w obrębie zwierząt, projekt musi uwzględniać przeniesienie, wymywanie i zmienność biologiczną wybranych punktów końcowych.
Źródła zmienności zmieniające wynik
Wynik zakrzepicy zastawki AV jest specyficzny dla konfiguracji eksperymentalnej. Materiał i geometria urządzenia, odsłonięta powierzchnia, wymiary obwodu, warunki przepływu, czas ekspozycji i postępowanie okołozabiegowe mają wpływ na tworzenie się skrzepliny. Na odpowiedź wpływają również czynniki biologiczne, w tym liczba i czynność płytek krwi, hematokryt, stan krzepnięcia, gatunek, zmienność osobnicza i stosowane jednocześnie leki.
Czynniki te to nie tylko szczegóły techniczne. Jeśli różnią się one w zależności od grupy lub okresu badania, zmieniają widoczny efekt leczenia. Wyjściowa hematologia, spójne przygotowanie i obsługa urządzenia, skalibrowany pomiar przepływu, standaryzacja procedur i pełna dokumentacja są częścią ważności punktu końcowego. Protokół powinien również określać, w jaki sposób nieoczekiwane przerwanie przepływu, awaria urządzenia lub niewystarczające utworzenie skrzepliny będą rejestrowane i leczone w analizie.
Kontekst NHP stanowi wartość dodaną, gdy badanie wymaga zintegrowanej oceny in vivo narażenia, farmakologii i odpowiedzi hemostatycznej u naczelnych. Nie eliminuje to konieczności kwalifikacji modelu. Historyczne badania rezusów pokazują, że zastawki AV wspierają badania nad wytwarzaniem skrzeplin i działaniem przeciwzakrzepowym, ale nie ustalają, że wyniki przenoszą się w niezmienionej postaci na inny gatunek, konfigurację urządzenia, klasę związku lub współczesne warunki badawcze.[1,2]
Interpretacja tłumaczeniowa: profil korzyści i ryzyka
Wniosek, że kandydat na „zmniejszoną zakrzepicę” sam w sobie niewiele mówi. Pytaniem jest, czy zmniejszenie wystąpiło w przepływie, w obciążeniu skrzepliną, czy w obu przypadkach; czy śledziło ekspozycję na lek i oczekiwany mechanizm farmakodynamiczny; i co pokazują dane dotyczące hemostazy w tym samym zakresie ekspozycji. Rozbieżność między punktami końcowymi ma charakter informacyjny i zwykle odzwierciedla różnice w czułości, czasie, lokalizacji lub mechanizmie skrzepu, a nie nieudany eksperyment.
Model zakrzepicy zastawki AV NHP przyczynia się do przedklinicznej oceny farmakologii przeciwzakrzepowej, gdy jej konfiguracja i punkty końcowe zostaną dopasowane do podjętej decyzji. Jego siła polega na połączeniu przepływu, skrzepliny związanej z urządzeniem i farmakologii ogólnoustrojowej w jednym kontekście eksperymentalnym. Równie duże znaczenie mają jego ograniczenia: jest to model ostry, zależny od konfiguracji i nie może sam ustalić skuteczności klinicznej, ryzyka krwawienia klinicznego ani korzyści terapeutycznych w określonej populacji pacjentów.
W przypadku zespołów translacyjnych praktycznym priorytetem jest najpierw zdefiniowanie pytania, a następnie wybranie punktu końcowego przepływu, punktu końcowego skrzepliny i pakietu hemostatycznego zaprojektowanego do wspólnego odczytania. To dopasowanie, a nie liczba pomiarów, określa, czy badanie dostarcza dowodów istotnych dla podjęcia decyzji.
Często zadawane pytania
P: Co mierzy model zakrzepicy zastawki AV NHP?
Odp.: Ocenia tworzenie się skrzepliny na określonym odcinku testowym mającym kontakt z krwią lub w obrębie określonego segmentu testu mającego kontakt z krwią pod wpływem przepływu w NHP. W zależności od protokołu punkty końcowe obejmują zachowanie przepływu, obciążenie odzyskaną skrzepliną, skład skrzepliny, ekspozycję na lek, aktywność farmakodynamiczną i działanie hemostatyczne.
P: Po co mierzyć przepływ i masę skrzepliny?
Odp.: Przepływ opisuje drożność funkcjonalną podczas eksperymentu, podczas gdy masa skrzepliny określa ilościowo osadzony materiał w punkcie końcowym pobierania. Środki są powiązane, ale nie wymienne: skrzeplina czasami gromadzi się bez okluzji, a mały, strategicznie zlokalizowany skrzep wpływa nieproporcjonalnie na przepływ.
P: Czy mniejsze obciążenie skrzepliną oznacza mniejsze ryzyko krwawienia?
O: Nie. Skuteczność przeciwzakrzepowa i krwawienie to powiązane domeny farmakologiczne, które należy mierzyć oddzielnie. Badanie powinno obejmować ocenę hemostazy odpowiednią do mechanizmu, a samo zmniejszenie obciążenia skrzepliną nie oznacza braku klinicznego ryzyka krwawienia.
P: Czy wyniki zastawki AV mogą przewidywać kliniczne skutki zakrzepicy?
Odp.: Dostarczają przedklinicznych dowodów na działanie przeciwzakrzepowe w określonej konfiguracji urządzenia i przepływu. Same w sobie nie pozwalają przewidzieć wyników klinicznych ani nie odtwarzają wszystkich mechanizmów samoistnej zakrzepicy tętniczej lub żylnej.
Referencje
- Mason RG, Wolf RH, Zucker WH, Shinoda BA.Model przecieku naczyniowego u naczelnych innych niż człowiek do wytwarzania skrzepliny.Badania laboratoryjne. 1976;34(6):558-564.PubMed PMID: 819713.
- Mason RG, Wolf RH, Zucker WH, Shinoda BA, Mohammad SF.Wpływ środków przeciwzakrzepowych oceniany w modelu przecieku naczyniowego u naczelnych innych niż człowiek.Amerykański dziennik patologii. 1976.PubMed PMID: 820202; pełny tekst.
